PCR扩增目的基因
王瑞斌1，黄浩哲2
(1. 西南医科大学，2021级口腔20210499120011)
(2. 西南医科大学，2021级口腔20210499120017）
摘要：目的：通过PCR技术对目的基因LDH-B进行扩增，再通过琼脂糖凝胶电泳中的扩增产物条带与maker条带进行对比，观察条带位置从而判断目的基因是否扩增成功，熟悉掌握聚合酶链式反应（PCR）实验技术及实验原理，了解PCR扩增引物设计的原理和方法。结果：电泳条带清晰，各条带分明，见少许拖影现象，泳道见一明一暗两条明显条带，较浅条带分子量与目的基因相同。结论：实验成功扩增目的基因，但条带不清晰，二者灰度值差异明显，可能与引物量太多、引物特异性太弱、酶活性降低或PCR程序设计不合理等原因相关。
Abstract: Objective: To amplify the target gene LDH-B by PCR technique, and then compare the amplified product bands with maker bands in agarose gel electrophoresis, observe the position of the bands to determine whether the target gene is amplified successfully, to be familiar with the experi ……此处隐藏885个字……O配到反应体系，加量需准确无误，并且避免污染。
2.2.3 电泳条带
影响DNA条带扭曲的因素包括电泳缓冲液的种类和浓度、环境温度、凝胶的均一性、琼脂糖的生产质量[1]。也与上样相关，若不小心破坏了凝胶，也会产生条带的扭曲。该实验中下方的条带较上方更明显更亮，二者灰度值差异明显，可能是因为引物量太多、引物特异性太弱、酶活性降低或PCR程序设计不合理等原因，从负极往正极分别为DNA产物及引物二聚体。
2.2.4 PCR引物设计原则
①引物与引物之间不应存在互补序列避免形成稳定的二聚体或发夹结构, 引物与模板的序列要紧密互补。②在选择用来扩增不同物种DNA的引物时, 应避开m RNA的5′和3′末端非翻译区序列。③引物长度以及GC含量合适以保证合适的Tm值。④引物3′端不能选择A, 最好选择T。⑤引物序列在模板内应当没有其他相似性较高的序列。⑥引物5′端可以修饰, 3′端不可修饰且要避开密码子第3位[2]。
3 结论
本实验通过对LDH-B基因的扩增及检测，熟悉并练习了实验的操作过程，对实验中可能存在的问题和需要注意的细节进行了分析，之后对于实验结果进行了思考，分析了实验中各种因素的干扰和影响，锻炼了学生的思考能力，通过课后的文献及资料查询解决问题，既提高了学生的动手能力也同时反思纠错的能力，对于建立良好的科研思考模式有较大帮助。
[1]刘阳,杨淑霞,赖翼,李敏惠,胡松,邹强.影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素[J].生物学杂志,2009,26(02):70-72.
[2]尤超,赵大球,梁乘榜,周春华.PCR引物设计方法综述[J].现代农业科技,2011(17):48-51.
